产品规格
| BFNC86065-01 | 10×100 μl | 保存：-80℃（3个月） |
| BFNC86065-02 | 50×100 μl | 保存：-80℃（3个月） |
| pGADT7 (control vector, 10 ng/μl) | 10 μl | 保存：-80℃（12个月） |
| Carrier DNA (10 μg/μl) | 100 μl | 保存：-20℃（12个月） |
| PEG/LiAC: | 5 ml | 保存：4℃（12个月） |
基因型
产品说明
YM4271菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株EGY48、Y187等通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为：trp1，leu2，ura，报告基因为： HIS3。可用于酵母双杂，酵母单杂或异源蛋白表达等试验。BFB生命科学的YM4271感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
- 取100 µl冰上融化的YM4271感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA (95-100℃，5 min，快速冰浴，重复一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
- 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
- 5000 rpm离心40 s弃上清，ddH2O 400 µl重悬，离心30 s弃上清。
- ddH2O 50 µl重悬，涂板，29℃培养48-96 h。
注意事项
- 感受态细胞最好在冰上融化。
- 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
- 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
- YM4271酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
- 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
- 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1 mm克隆。