产品规格

基因型

产品说明

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。C58C1发根农杆菌菌株含有pRiA4b农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（蔷薇科，夹竹桃科，豆科，茄科，黄芩，烟草等），同时具有链霉素，利福平抗性。BFB生命科学的C58C1化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测，转化效率>1×10⁴ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 取-80℃保存的C58C1发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 冰浴中拿出放室温，加入700 μl无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养 2小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。

备注

1. 农杆菌相关抗生素配方：
   

   抗生素	配方	原液	工作液
   羧苄青霉素（carb）	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	50 mg/ml	50 μg/ml
   硫酸卡那霉素（kan）	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	50 mg/ml	50 μg/ml
   链霉素（strep）	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	10 mg/ml	50 μg/ml
   利福平（rif）	DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	10 mg/ml	20 μg/ml
   庆大霉素（gent）	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	20 mg/ml	40 μg/ml
   氯霉素（cam）	无水乙醇溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	34 mg/ml	34 ug/ml

    

2. 常用农杆菌抗性：（R：抗；S：敏感。）
   

   农杆菌菌株	羧苄青霉素(carb)	链霉素(strep)	利福平(rif)	氯霉素(cam)	硫酸卡那霉素(kan)
   Ar.A4	S	S	S	S	R
   MSU440	S	R	S	S	S
   Ar.Qual	S	R	S	R	S
   C58C1	S	R	R	S	S
   ATCC15834	S	S	S	S	S
   K599	S	R	S	S	S
   Ar.1193	R	R	R	S	S

 

3. TY配方（1L）：
   

   Tryptone	5 g
   Yeast extract	3 g

   • 补水到1 L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌。
   • 配制1 M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌。
   • 每1 L灭菌的TY液体营养液中加入10 ml无菌的1 M氯化钙水溶液即可。
   • 若配制TY固体培养基，则加入15 g琼脂粉。

注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。
4. C58C1具有链霉素、利福平抗性，不可用于具有链霉素抗性或利福平抗性质粒的转化。