产品规格
BFNC86201-01 | 10 μg/μl, 100 µl |
BFNC86201-02 | 10 μg/μl, 1 ml |
保存条件(保质期) | -20℃(12个月) |
产品说明
Carrier DNA(鲑鱼精DNA)为短的线形单链DNA,可包裹质粒DNA,在酵母细胞摄取外源质粒DNA过程中发挥作用,促进质粒进入酵母细胞,另外还可保护质粒免于被DNA酶降解。在每次使用前务必进行两次热变性,保证Carrier DNA在转化实验体系中以单链形式存在。Carrier DNA是BFB生命科学生产的酵母感受态细胞转化所必需的配套试剂,每个转化反应需要10 µl Carrier DNA。
操作方法
- Carrier DNA 在每次使用前要通过加热处理使其变性为单链状态,步骤如下:Carrier DNA 放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min,再次放95℃水浴或金属浴3 min,快速插入冰中,静置3 min以上。
- 取100 µl冰上融化的酵母感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒2-5 µg,Carrier DNA 10 µl,PEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。
- 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
- 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 µl 重悬,离心 30s弃上清。
- ddH2O 50 µl重悬,涂板,29℃培养48-96 h。
注意事项
- 在每次使用前务必进行两次热变性,保证Carrier DNA在转化实验体系中以单链形式存在。
- Carrier DNA可在4℃短时间保存,如需长时间保存请放-20℃。